Mengapa Bakteri Digunakan dalam Teknologi DNA Rekombinan - Perbedaan Antara

Mengapa Bakteri Digunakan dalam Teknologi DNA Rekombinan

Teknologi DNA rekombinan adalah metode menggabungkan DNA dari dua spesies dan memasukkannya ke dalam organisme inang, untuk menghasilkan kombinasi genetik baru. Proses laboratorium yang digunakan untuk menghasilkan DNA rekombinan adalah kloning molekuler. PCR mereplikasi fragmen DNA yang diinginkan yang dimasukkan ke dalam plasmid. Plasmid rekombinasi diubah menjadi organisme inang untuk menghasilkan sejumlah besar salinan dari plasmid rekombinasi. Bakteri adalah organisme inang yang digunakan dalam teknologi DNA rekombinan dan ada beberapa alasan penggunaannya sebagai inang.

Bidang-bidang Utama yang Dicakup

1. Apa itu Teknologi DNA Rekombinan
- Definisi, Langkah-Langkah Proses
2. Mengapa Bakteri Digunakan dalam Teknologi DNA Rekombinan
- Alasan Penggunaan Bakteri sebagai Organisme Tuan Rumah

Istilah Kunci: Bakteri, Kloning Molekuler, Laju Pertumbuhan, Teknologi DNA Rekombinan, PCR, Plasmid, Seleksi


Apa itu Teknologi DNA Rekombinan

Teknologi DNA rekombinan adalah teknik biologi molekuler yang digunakan untuk menghasilkan molekul DNA rekombinan yang membawa karakteristik yang diinginkan ke organisme tertentu. Kloning molekuler adalah teknik laboratorium yang digunakan untuk menghasilkan sejumlah besar DNA rekombinan digabungkan dengan PCR. Proses kloning molekuler terdiri dari tujuh langkah seperti dijelaskan di bawah ini.

  1. Pilihan organisme inang dan vektor kloning - Organisme inang utamanya adalah bakteri. Pilihan vektor kloning tergantung pada pilihan organisme inang, ukuran fragmen DNA asing, dan tingkat ekspresi.
  2. Persiapan vektor DNA - Vektor kloning dicerna dengan enzim restriksi untuk membuat ujung yang kompatibel dengan fragmen DNA asing.
  3. Persiapan DNA untuk dikloning - Fragmen DNA yang diinginkan untuk dikloning dapat diamplifikasi oleh PCR dan dicerna dengan enzim restriksi untuk menghasilkan ujung yang kompatibel dengan vektor kloning.
  4. Pembuatan DNA rekombinan - Vektor kloning yang dicerna dan fragmen PCR diikat dengan perlakuan dengan DNA ligase.
  5. Pengenalan DNA rekombinan ke dalam organisme inang - Molekul DNA rekombinasi diubah menjadi bakteri untuk mendapatkan sejumlah besar salinan.
  6. Seleksi organisme hasil transformasi - penanda yang dapat dipilih seperti resistensi antibiotik dapat digunakan untuk memilih bakteri yang ditransformasikan dalam kultur.
  7. Menyaring klon dengan DNA yang diinginkan - Sistem penyaringan biru-putih, PCR, analisis fragmen restriksi, hibridisasi asam nukleat, sekuensing DNA, dan probe antibodi dapat digunakan untuk menyaring klon dengan fragmen DNA yang diinginkan.

Langkah-langkah teknologi DNA rekombinan ditunjukkan pada Gambar 1.


Gambar 1: Teknologi DNA Rekombinan

Mengapa Bakteri Digunakan dalam Teknologi DNA Rekombinan

Bakteri menjadi 'pabrik' yang menghasilkan sejumlah besar salinan DNA rekombinan. Ada beberapa alasan penggunaan bakteri sebagai inang dalam teknologi DNA rekombinan. Mereka;

  1. Sel bakteri mudah tumbuh, dipelihara, dan dimanipulasi di laboratorium. Persyaratan pertumbuhannya sederhana dalam bakteri dan dapat dipasok dalam cawan petri. Kondisi pertumbuhan dapat disediakan dengan mudah di dalam inkubator. Mereka juga dapat mentoleransi DNA asing di dalam sel.
  1. Mereka berkembang biak dengan cepat. Karena bakteri adalah organisme kecil, mereka tumbuh dengan cepat daripada jenis sel yang kompleks. Tingkat pembelahan sel mereka tinggi.
  1. Elemen-elemen ekstrachromosomal dari bakteri yang dikenal sebagai plasmid dapat dimanipulasi dan dapat digunakan sebagai pembawa DNA rekombinan ke dalam sel. Plasmid dapat diisolasi dari bakteri untuk memasukkan DNA asing dan kemudian diubah kembali menjadi bakteri.
  1. Plasmid rekombinan dan rekombinan dapat dengan mudah diisolasi dari bakteri. DNA plasmid dapat diisolasi dengan proses laboratorium yang mudah melalui lisis sel bakteri.

Penggunaan bakteri dalam teknologi DNA rekombinan ditunjukkan dalam Gambar 2.


Gambar 2: Penggunaan Bakteri dalam Teknologi DNA Rekombinan

E. coli adalah jenis bakteri yang banyak digunakan karena beberapa alasan:

  • E. coli genom dipelajari dengan baik dan relatif sederhana. Hanya membawa 4, 400 gen. Selain itu, tetap haploid sepanjang hidup. Karena itu, rekayasa protein mudah dilakukan E. coli sebagai salinan gen tunggal ada untuk disembunyikan oleh mutagenesis diarahkan-situs.
  • Tingkat pertumbuhan E. coli tinggi. Ini bereplikasi dengan cepat dalam waktu 20 menit. Oleh karena itu, mudah untuk mendapatkan fase log (pertengahan jalan ke kepadatan maksimum).
  • Banyak E. coli strain aman untuk ditangani dengan kebersihan yang wajar.
  • Persiapan sel yang kompeten (sel-sel yang mampu mengambil DNA asing) dan transformasi molekul rekombinan mudah dilakukan. E. coli.

Kesimpulan

Teknologi DNA rekombinan digunakan untuk memperkenalkan karakteristik yang diinginkan pada organisme. Bakteri digunakan sebagai model dalam teknologi DNA rekombinan karena banyak alasan seperti pertumbuhan dan manipulasi yang mudah, pembelahan sel yang cepat, kesederhanaan, kemampuan untuk memilih dan menyaring transforman.

Referensi:

1. Griffiths, Anthony JF. "Membuat DNA rekombinan." Pengantar Analisis Genetik. Edisi ke-7., Perpustakaan Kedokteran Nasional AS, 1 Januari 1970,