Apa Perbedaan Antara ELISA Langsung dan Tidak Langsung - Perbedaan Antara

Apa Perbedaan Antara ELISA Langsung dan Tidak Langsung

Itu perbedaan utama antara ELISA langsung dan tidak langsung adalah itu dalam ELISA langsung, antibodi primer dikonjugasikan langsung ke enzim deteksi sedangkan, dalam ELISA tidak langsung, antibodi sekunder yang melengkapi antibodi primer terkonjugasi dengan enzim pendeteksi. Ini berarti ELISA langsung menggunakan antibodi tunggal sementara ELISA tidak langsung menggunakan dua antibodi.

ELISA langsung dan tidak langsung adalah dua metode ELISA (enzyme-linked immunosorbant assay) yang digunakan untuk mendeteksi keberadaan antigen atau antibodi spesifik dalam medium.

Bidang-bidang Utama yang Dicakup

1. Apa itu ELISA Langsung
- Definisi, Prosedur, Karakteristik
2. Apa itu ELISA Tidak Langsung
- Definisi, Prosedur, Karakteristik
3. Apa Persamaan Antara ELISA Langsung dan Tidak Langsung
- Garis Besar Fitur Umum
4. Apa Perbedaan Antara ELISA Langsung dan Tidak Langsung
- Perbandingan Perbedaan Kunci

Ketentuan Utama

ELISA Langsung, Enzim Deteksi, ELISA Tidak Langsung, Antibodi Primer, Antibodi Sekunder, Substrat


Apa itu ELISA Langsung

ELISA langsung adalah metode ELISA yang memungkinkan deteksi antigen dengan antibodi primer yang terhubung dengan enzim itu sendiri. Metode ELISA ini pertama kali dikembangkan Perlmann dan Engvall. Ini dianggap sebagai bentuk ELISA paling sederhana. Langkah-langkah ELISA langsung tercantum di bawah ini:

  1. Melapisi permukaan piring dengan sampel;
  2. Inkubasi piring dengan antibodi primer yang terkonjugasi enzim;
  3. Mencuci untuk menghilangkan antibodi yang tidak terikat dari piring;
  4. Penambahan substrat yang dibutuhkan oleh reaksi enzimatik;
  5. Deteksi sinyal yang dihasilkan dari plat.

Di sini, dua jenis utama enzim yang terkonjugasi dengan antibodi primer adalah HRP (horseradish peroxidase) dan alkaline phosphatase. Tiga jenis substrat yang digunakan bersama dengan HRP adalah OPD (o-phenylenediamine dihydrochloride), TMB (3, 3 ', 5, 5'-tetramethylbenzidine), dan ABTS (2, 2'-Azinobis [3-ethylbenzothiazoline-6- asam sulfonat] -diammonium salt). Substrat yang digunakan bersama dengan alkaline phosphatase adalah PNPP (p-Nitrophenyl Phosphate, Disodium Salt).Reaksi enzimatik pada substrat menyebabkan perubahan warna pada media, yang tergantung pada jenis substrat dan enzim yang digunakan untuk reaksi. Ini memfasilitasi deteksi sampel dengan antigen target.


Gambar 1: ELISA langsung

ELISA langsung lebih cocok untuk deteksi jumlah antigen dengan berat molekul tinggi dalam sampel. Semakin sedikit langkah dalam metode ELISA ini menjadikannya alat tes yang lebih cepat. Namun, karena biaya dan waktu yang digabungkan dengan pelabelan antibodi primer dengan enzim, penggunaan ELISA langsung sangat jarang. Di sisi lain, itu menghasilkan efek buruk pada antigen target juga.

Apa itu ELISA Tidak Langsung

ELISA tidak langsung adalah metode lain dari ELISA yang menggunakan dua antibodi untuk pendeteksian: antibodi primer dan sekunder. Langkah-langkah ELISA tidak langsung adalah sebagai berikut:

  1. Melapisi permukaan piring dengan sampel;
  2. Inkubasi lempeng dengan antibodi primer;
  3. Mencuci untuk menghilangkan antibodi yang tidak terikat dari piring;
  4. Inkubasi lempeng dengan antibodi sekunder terkonjugasi dengan enzim pendeteksi;
  5. Mencuci untuk menghilangkan antibodi yang tidak terikat dari piring;
  6. Penambahan substrat yang dibutuhkan oleh reaksi enzimatik;
  7. Deteksi sinyal yang dihasilkan dari plat.


    Gambar 2: ELISA Tidak Langsung

ELISA tidak langsung dihasilkan melalui dua langkah pengikatan antibodi. Di sisi lain, antibodi sekunder terkonjugasi dengan enzim pendeteksi. Secara umum, ada banyak antibodi sekunder yang terkonjugasi dengan enzim. Di sini, antibodi sekunder terutama merupakan antibodi anti-spesies poliklonal. Karena ketersediaan antibodi yang terkonjugasi enzim, metode ELISA tidak langsung lebih sering digunakan dalam tes imunologis dalam mendeteksi parasit, bakteri, dan virus. Di sisi lain, beberapa antibodi sekunder dapat diikatkan pada antibodi primer pada lempeng. Oleh karena itu, sensitivitas pengujian sangat tinggi.

Kesamaan Antara ELISA Langsung dan Tidak Langsung

  • ELISA langsung dan tidak langsung adalah dua metode ELISA di mana antigen yang menarik secara langsung melekat pada lempeng.
  • Kedua metode terlibat dalam deteksi keberadaan molekul protein spesifik dalam sampel. Molekul protein ini langsung melekat pada piring.
  • Piring 96-Sumur atau tabung strip 8-sumur digunakan dalam kedua metode. Kedua pelat dan tabung ini terbuat dari polistirena. Pelat 96-sumur menyediakan banyak ruang untuk penentuan pengenceran optimal untuk reaksi. Sementara itu, tabung strip 8-sumur lebih baik untuk pengujian yang disetel dengan halus.

Perbedaan Antara ELISA Langsung dan Tidak Langsung

Definisi

Direct Elisa mengacu pada jenis ELISA di mana antibodi primer terkonjugasi dengan enzim pendeteksi sementara ELISA tidak langsung mengacu pada jenis ELISA di mana antibodi sekunder dikonjugasikan dengan enzim pendeteksi.

Jumlah Antibodi yang Digunakan

ELISA langsung menggunakan satu antibodi, yang merupakan antibodi primer sedangkan ELISA tidak langsung menggunakan dua antibodi, antibodi primer dan sekunder. Ini adalah perbedaan utama antara ELISA langsung dan tidak langsung.

Enzim Deteksi Terhubung ke

Terlebih lagi, enzim pendeteksi dihubungkan dengan antibodi primer dalam ELISA langsung sedangkan enzim pendeteksi dihubungkan dengan antibodi sekunder dalam ELISA tidak langsung.

Intensitas Sinyal

Perbedaan lain antara ELISA langsung dan tidak langsung adalah bahwa sinyal yang dihasilkan oleh ELISA langsung kurang intensif sedangkan sinyal yang dihasilkan oleh ELISA tidak langsung lebih intensif karena amplifikasi sinyal.

Sinyal Latar Belakang

Namun, ELISA langsung menghasilkan lebih banyak sinyal latar belakang daripada ELISA tidak langsung.

Kepekaan

ELISA langsung kurang sensitif sedangkan ELISA tidak langsung lebih sensitif. Ini juga merupakan perbedaan antara ELISA langsung dan tidak langsung.

Reaktivitas Lintas

Namun perbedaan lain antara ELISA langsung dan tidak langsung adalah reaktivitas silang. Yaitu, reaktivitas silang minimum dalam ELISA langsung sementara itu signifikan dalam ELISA tidak langsung.

Waktu

Selanjutnya, ELISA langsung lebih sedikit memakan waktu karena langkah yang lebih sedikit sedangkan ELISA tidak langsung lebih memakan waktu karena langkah pengikatan antibodi yang berlipat ganda.

Frekuensi Penggunaan

Walaupun ELISA langsung relatif jarang, ELISA tidak langsung lebih umum.

Kesimpulan

ELISA langsung hanya menggunakan antibodi primer untuk mendeteksi antigen spesifik. Ini berarti antibodi primer terkonjugasi dengan enzim deteksi dalam ELISA langsung. Tetapi, ELISA tidak langsung menggunakan antibodi primer untuk berikatan dengan antigen sementara antibodi sekunder yang terkonjugasi enzim berikatan dengan antibodi primer. ELISA langsung kurang umum karena kurangnya ketersediaan antibodi primer terkonjugasi-enzim. Perbedaan utama antara ELISA langsung dan tidak langsung adalah jumlah antibodi yang digunakan.

Referensi:

1. "Jenis-jenis ELISA."Bio-Rad, Laboratorium Bio-Rad,